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熒光定量服務(wù)都有哪些內(nèi)容和要求?
點(diǎn)擊次數(shù):2313 更新時(shí)間:2020-09-24
  在PCR擴(kuò)增中,添加了一對(duì)引物和特異性熒光探針。該探針是線性寡核苷酸,其兩端分別標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光猝滅基團(tuán)。探針完成后,報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,無(wú)法用PCR儀檢測(cè)到。在PCR擴(kuò)增過(guò)程中(延伸階段),探針被Taq酶的5'-3'核酸外切酶活性消化并降解,從而使報(bào)告熒光團(tuán)和淬滅熒光團(tuán)分離,從而使熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)能夠接收到熒光。信號(hào),即每個(gè)擴(kuò)增的DNA鏈,都有一個(gè)熒光分子形成,從而使熒光信號(hào)的積累與PCR產(chǎn)物的形成*同步,這是熒光定量服務(wù)的基礎(chǔ)。那么它服務(wù)的內(nèi)容和要求是什么?
 

熒光定量服務(wù)

  一、服務(wù)內(nèi)容:
  1、從動(dòng)物細(xì)胞,人或動(dòng)物組織中提取核酸;
  2、分析核酸的濃度和純度;
  3、熒光定量服務(wù)PCR檢測(cè);
 ?。?)引物和探針的設(shè)計(jì)與合成;
  (2)定量和相對(duì)定量的選擇;
 ?。?)探針?lè)ê腿玖戏ǖ倪x擇;
 ?。?)通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)目標(biāo)基因;
 ?。?)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析;
  4、實(shí)驗(yàn)前服務(wù):根據(jù)客戶提供的目標(biāo)基因序列或NCBI序列號(hào)提供客戶引物和探針,并選擇引物和探針;
  5、正式實(shí)驗(yàn)服務(wù):根據(jù)初步實(shí)驗(yàn)中選擇的引物和探針,通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)樣品,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
  二、熒光定量服務(wù)要求:
  1、請(qǐng)?zhí)峁┍M可能多的新鮮材料(各種材料的RNA提取量請(qǐng)參考“總RNA提取”),或直接提供純化的總RNA(大于5ug/樣品);(有關(guān)各種材料的DNA提取量,請(qǐng)參閱“DNA提取”),或直接提供純化的DNA(大于5ug/樣品)。
  2、請(qǐng)通過(guò)電子郵件提供已知的全長(zhǎng)基因序列。
  3、請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景信息:DNA/RNA來(lái)源,豐度等。
 
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